瘤患者行使（DNA+RNA）NGS时间或平台举办复共鸣2：保举常例分子学检测结果为阴性的骨与软机闭肿检 践诺中临床，C、FISH等常例病理搜检确诊部门骨与软机闭肿瘤难以通过IH，判别是否存正在分子遗传学非常此时必要借帮NGS检测来，病理诊断从而辅帮。CCNB基因协调以及BCOR-内部串联反复（internal tandem duplications如既往诊断的骨与软机闭幼圆细胞未分裂赘瘤中极少类型经NGS检测觉察永诀存正在CIC基因重排、BCOR-，）突变ITD，的分子遗传学变换按照相对特异性，COR遗传学变换赘瘤[11-12]正式定名为CIC重排赘瘤和伴有B。100卵白的梭形细胞肿瘤极少共表达CD34和S-，疫表型有重叠因形状和免，以做出至极明晰的诊断通过常例病理学法子难，1/2/3、BRAF、RAF1和RET等基因重排[13]但通过NGS检测觉察这些极端好似的肿瘤永诀发作了NTRK，称举办定名诊断可采用基因名，、RAF1重排梭形细胞肿瘤或RET重排梭形细胞肿瘤等如NTRK重排梭形细胞肿瘤、BRAF重排梭形细胞肿瘤。表此，变不明的病例对待基因突，多个探针的FISH检测NGS检测功用鲜明优于。断的骨与软机闭肿瘤类型见表1保举采用NGS检测辅帮病理诊，为新近报道的病种此中极少病变类型，恶性上皮样肿瘤[14]如GLI1遗传学变换的，的病例积聚有待更多。 正在多种肿瘤中被证据有用跟着免疫搜检点强迫剂，中的运用也日益获得珍贵免疫诊疗正在软机闭赘瘤。赘瘤的亚型扩展试验觉察一项闭于晚期骨与软机闭，化脂肪赘瘤的ORR永诀抵达23%和10%帕博利珠单抗诊疗未分裂多形性赘瘤和去分，瘤诊疗方面拥有必然临床疗效[35]提示帕博利珠单抗正在未分裂多形性肉。移性赘瘤的ORR仅为5%纳武利尤单抗单用诊疗转，ORR增至16%但联用伊匹单抗后，些赘瘤亚型诊疗方面拥有必然潜力[36]提示纳武利尤单抗协同伊匹单抗也许正在某。有帮于指挥分子亚型分类而寻找符合的分子记号物，势人群筛选优，疫诊疗加倍精准从而使赘瘤免。 S生物消息学领会应契合范例请求共鸣8：骨与软机闭肿瘤的NG，领会及质地左右流装备完好的圭臬程 次检测本钱较低而寻常运用于临床古代基因检测要领因适用性高和单，用限造（表2）[15-16]但也存正在极少时间缺陷和临床应。之下比拟，定上风：1）可能同时涵盖数百个基因NGS检测正在时间和临床诊疗中拥有一，围更广检测范；位点的多种变异类型2）同时检测扫数，些变异类型避免漏掉某，精准分型及诊疗战略指挥可为初诊患者供给完全的；r mutation burden3）可能评估肿瘤突变负荷（tumo，atellite instabilityTMB）和微卫星担心谧性（micros，分子记号物[17-18]MSI）等免疫诊疗干系的；来的样本耗竭和韶华耽误4）避免单基因检测带，续评估供给根据可能神速地为后。此因，的样本行使NGS复检提倡古代检测为阴性。疾病希望时当患者映现，面的基因检测可再次举办全，耐药机造和新的标靶有帮于觉察潜正在的，案的采用供给根据为下一步诊疗方。 前目，修复基因缺陷（mismatch repair-deficient临床常用的免疫搜检点强迫剂生物记号物席卷PD-L1高表达、错配，tellite instability-highdMMR）/微卫星高度担心谧性（microsa， mutation burden-highMSI-H）和高肿瘤突变负荷（tumor，-H）TMB。行动行使特定药物的临床分子记号物PD-L1仅正在部门肿瘤适宜证中，028探讨中正在SARC-，织赘瘤的疗效之间也没有明晰的相干[35PD-L1的表达与PD-1单抗诊疗软组，7]3。、不限机闭学类型的免疫诊疗生物记号物[38-40]dMMR/MSI-H、TMB-H是得到FDA允许，有也许从免疫诊疗中获益拥有此类变换的患者将。mutations/mb）[41]骨与软机闭肿瘤中位TMB偏低（5 ，MB≥10 mutations/mb）但仍有约5%赘瘤患者拥有高TMB（T，亚型中[42]且漫衍于多个。率极端低（0.78%）[43]MSI-H正在赘瘤患者中的发作频，需大周围、前瞻性的探讨证据对赘瘤免疫诊疗的指挥意思尚。实践情形集合临床，软机闭肿瘤患者对希望期骨与，测MSI、TMB等免疫诊疗干系的分子记号物可采用NGS大panel（300基因）检，测结果采用免疫诊疗部门患者可参考检。本的希望期患者难以获取即时标，的检测结果行动参考应审慎采用既往样本。 表此， endothelial growth factor receptor抗血管多靶点类药物的靶点苛重为血管内皮孕育因子受体（vascular，常务副会长：龚春燕，其他酪氨酸激酶VEGFR）及。机闭肿瘤中正在骨与软，品监视处置局（NMPA）允许如安罗替尼已得到中国国度药，监视处置局（FDA）允许帕唑帕尼得到美国食物药品，瘤）得到《NCCN软机闭赘瘤临床践诺指南》保举[6]瑞戈非尼用于非特异性机闭学亚型软机闭赘瘤（非脂肪肉；CSCO经类型骨赘瘤诊疗指南》保举重组人血管内皮强迫素得到《2018。等基因形态与诊疗后果有明晰的相干目前尚未有直接证据显示VEGFR，可能不举办NGS检测故采用此类诊疗计划。 测时间比拟与古代检，纷乱性较高NGS检测，消息凌乱且申诉，读形成必然贫困给临床数据解。of Sequence Variants in Cancer、《临床分子病理尝试室二代基因测序检测专家共鸣》以及美国医学遗传学和基因组学学院保举的胚系突变解读流程[51-52]应根据美国分子病理学会、美国临床肿瘤学会、CAP共鸣Standards and Guidelines for the Interpretation and Reporting ，读、可申诉限造和质地左右等方面梳理NGS申诉的中心解读逻辑从体细胞变异分级注脚及临床解读、胚系突变分级注脚及临床解，GS申诉解读才力以晋升临床专家N，闭头消息神速抓取，临床获益使患者，读对临床形成的潜正在影响同时尽也许地避免太过解。 的质控（如涵盖Q30等FASTQ质地参数）NGS数据的生物消息领会应席卷原始测序数据，接头序列去除、低质地序列去除等数据过滤及质控（引物序列去除、，过滤后数据Q30）紧张参考目标席卷，永诀选用符合的比对软件和参考基因组序列比对及质控（DNA、RNA需，参考基因组的比例等）质控目标席卷比对至，深度、靶向区域遮盖度、插入片断长度等紧张参数样本测序质控（DNA应包罗panel的遮盖，reads总量等紧张参数）RNA应包罗靶向区域测序，领会、注脚和筛选以及变异的审定。类型的变异针对差别，MSI、TMB及RNA层面的基因协调、表显子跳读等如DNA层面的碱基更换、插入/缺失、拷贝数变异、，息学要领举办领会采用特定的生物信，和临床样本举办才力验证并通过适量例数的圭臬品，高通量测序检讨生物消息学领会才力请求应契合国度卫生强健委临床检讨中央的，凿凿性和安谧性包管领会流程的。共鸣》《二代测序时间正在肿瘤精准医学诊疗中的运用专家共鸣》等共鸣的基础请求[44送检样本及十足测序和领会申诉流程应契合《临床分子病理尝试室二代基因测序检测专家，50]47-。 京积水潭病院沈靖南中山大学从属第一病院吴苏稼东部战区总病院肖修如 水兵军医大学第二从属病院叶招明浙江大学医学院从属第二病院张伟滨上海交通大学医学院从属瑞金医蔡修强中国医学科学院肿瘤病院蔡郑东上海市第一黎民病院郭卫北京大学黎民病院黎志宏 中南大学湘雅二病院林修华福修医科大学第一病院李修民山东大学齐鲁病院牛晓辉北院 序中国专家共鸣（2021年版）[J]. 中国肿瘤临床中国抗癌协会赘瘤专业委员会. 骨与软机闭肿瘤二代测,2120,7-1035.返回搜狐48(20): 102，看更查多 骨与软机闭肿瘤患者共鸣5：保举希望期，programmed death-ligand 1永诀采用IHC和NGS检测秩序性仙逝因子配体1（，B等免疫诊疗干系分子记号物PD-L1）、MSI、TM，辅帮免疫治按照结果疗 织肿瘤常见的变异样式基因协调是骨与软组。 000个基因协调中正在目前报道的近10，NGS要领审定约90%通过，）和RNA测序（RNA-seq）席卷DNA测序（DNA-seq。的探讨证实越来越多，NA-seq的填补RNA-seq是D，未检测到的协调[19]能检测到DNA-seq。含子序列冗长和存正在反复序列源由也许正在于：1）基因内，难以全数遮盖DNA探针；的肿瘤细胞占比低2）领导协调变异，NA的乖巧度低于检测D；程也许会影响基因组协调/重排的线]3）纷乱的转录或转录后的剪接加工过。此因，RNA-seq的时间举办复检保举行使DNA-seq协同。 尝试室维护圭臬与请求》的干系轨则NGS尝试室维护应契合《NGS，实时”为基础规定举办尝试室分区[44]以“职业有序、互不作对、预防污染、申诉。提倡席卷8大尝试区域NGS检测的尝试室，扩增一区）、文库扩增区（扩增二区）、文库检测区、测序区、电泳区别别为试剂预备区、标本与文库造备区、DNA打断区、杂交拘捕区（。中（室内质控）、领会后（结果申诉说明及临床运用）全流程的质地左右尝试室应做好领会前（标本收罗、运送和生存、管束及病理质控）、领会。 理的纷乱性鉴于赘瘤病，有须要行NGS检测举办靶点基因验证临床正在行使此类特异性的靶向药物之前，NTRK基因协调的赘瘤[23如NTRK强迫剂被允许运用于，2]3；准运用于上皮样赘瘤EZH2强迫剂被批，临床试验中也得到必然疗效[25正在其他INI1基因缺失的赘瘤，3]3；床试验中得到了必然疗效[26-27]CDK4/6强迫剂正在去分裂脂肪赘瘤临；性的炎性肌纤维母细胞瘤[28]ALK强迫剂可用于ALK协调阳；皮肤纤维赘瘤有用[34]PDGFR强迫剂对隆突性。 LIA或CNAS认证天分保举尝试室得到CAP、C。验中央、欧洲分子基因诊断质地定约等巨擘机构机闭的基因检测才力评估NGS临床尝试室应每年插足由病理质控中央、国度卫生强健委临床检，处置编造契合圭臬以证据尝试室质地。 GS检测结果困难为更好地治理N，生物消息等多个范畴专家构成的MTB可能组修由肿瘤、病理、分子生物、，物学干系证据以商议分子生，体化诊疗计划优化患者的个，物检测的临床诊疗途径从而竖立基于分子记号。的多样性以及患者对保存性能和生计质地的需求骨与软机闭肿瘤因为其纷乱多样的类型、诊疗，疗的需求更为危急使得多学科归纳治。因突变消息、肿瘤标本的病理学特质、先前的诊疗计划骨与软机闭肿瘤-MTB应基于入组患者的病理学和基，体的诊疗保举和计划以及跟踪情形造订具，药物、跨适宜证用药和相应临床探讨等应席卷与患者基因突变消息成亲的获批，临床生计获益为患者带来。和MTB的普及下笃信将来正在NGS，与软机闭肿瘤患者带来新祈望（表4）精准的检测和全数的临床商议将为骨。 体肿瘤比拟与其他实，断和诊疗更具离间性骨与软机闭肿瘤的诊，发希望徐徐且药物开，肿瘤的药物采用更为有限复举事治性骨与软机闭，临床试验阶段大无数尚处于。机闭肿瘤患者个别精准诊疗奠定根底NGS时间的范例运用将为骨与软。术的进一步兴盛笃信跟着科学技，机造的日臻完好干系处置监视，将会越来越范例化NGS的临床践诺，诊疗中表现加倍紧张的效用也将正在骨与软机闭肿瘤临床。 果和领会至闭紧张样素质地对检测结，送安闲、无污染、无降解[47]样本运送历程要确保各式样本运。 告分为4个部门实质：1）基础消息1份圭臬的肿瘤NGS基因检测报，息、临床消息、检测项目和日期等包罗患者姓名、样本类型、病理信；检测结果2）基因，次检测结果大白露出本，阅读便于；释和临床解读3）变异注，病性或性能影响领会对变异样式举办致，预后剖断和诊疗的相干声明其与病理诊断、，临床诊疗计划与用药指挥提倡按照指南与共鸣列出也许的；附录4），试剂、检测限造性、基因列表和参考文件等包罗质控消息、检测要领、检测限造、检测。 S检测有不同的骨与软机闭肿瘤患者共鸣3：保举常例分子学检测与NG，检测举办验思虑第3种证 红复旦大学从属中山病院杨吉龙天津医科大学肿瘤病院徐海荣北京积水潭病院张红英四川大学华西病院张星中山大学肿瘤防治中华莹奇上海市第一黎民病院王坚复旦大学从属肿瘤病院陈静华中科技大学同济医学院从属协和病院刘巍峰北京积水潭病院周宇心 靶向诊疗的骨与软机闭肿瘤患者共鸣4：保举思虑给与特异性，靶向药物干系的基因或潜正在基通过NGS时间或平台验证因 诊断的骨与软机闭肿瘤患者举办NGS检共鸣1：保举常例病理学搜检不行明晰测 明的是必要说，涵盖扫数的分子变换虽然NGS检测基础，疗的骨与软机闭肿瘤均必要举办NGS检测但并非扫数的辅帮病理诊断和适合靶向治。通过常例的分子检测举办诊断极少肿瘤类型中的分子非常可，A基因突变和侵袭性纤维瘤病中的CTNNB1基因突变等目前仍以一代测序为主如骨大幼胞瘤中的H3F3A基因突变、胃肠道间质瘤中的KIT、PDGFR；和炎性肌纤维母细胞瘤中的ALK基因重排可通过FISH检测举办辅帮诊断和指挥靶向诊疗非类型性脂肪瘤样肿瘤/高分裂脂肪赘瘤/去分裂脂肪赘瘤中的MDM2、CDK4基因扩增。表此，IHC检测可确诊的肿瘤类型对待极少通过常例光镜观测或，标的分子变换虽涉及有靶，行分子检测但无需再进，软机闭赘瘤可通过常例病理确诊如隆突性皮肤纤维赘瘤和腺泡状，FE3基因重排加以验证无需举办PDGFB、T；perivascular epithelioid cell tumorsTFE3 IHC符号阴性（倾轧TFE3重排型）的血管周上皮样细胞肿瘤（，TSC1/2基因突变检测PEComa）无需举办；符号得到确诊后无需举办SMARCB1基因突变或缺失检测形状类型的上皮样赘瘤正在INI1（SMARCB1）IHC。 疗希望后诊疗法子较限造恶性骨与软机闭肿瘤化，瘤的临床试验与践诺中获得了验证近年来靶向药物的疗效慢慢正在肉，获批适宜证部门药物，被指南保举部门药物，临床试验阶段部门药物仍正在。晚期骨与软机闭肿瘤的二线诊疗靶向诊疗大凡用于不行切除或，不行切除或晚期骨与软机闭肿瘤的一线诊疗但特定的靶向药物可能思虑用于特定类型。前目，向药物见表3[23-31]可能使希望期患者获益的靶。 收罗的机闭质地应≥50 mg手术和活检的奇怪机闭：手术，本≥2条穿刺样，.5 cm长度≥0。为术后30 min内奇怪样本理思生存办法，液氮中生存迟缓置于，或心理盐水冲洗洁净后或采用磷酸盐缓冲溶液，℃冰箱生存置于-80。马林生存液中固定（机闭与浸泡液体巨细比例为1∶10）也可机闭离体后30 min内浸入足量的10%中性福尔，重金属离子的固定液避免行使酸性及含有，送至检测尝试室72 h内寄。估样本中的肿瘤细胞含量可采用冷冻切片染色评。确保足够病理诊就义检奇怪机闭必需，举办NGS检测应正在明晰需求下。 病理范例请求取材FFPE样本：按，行苏木精-伊红染色NGS检测前应先辈，细胞的含量评估肿瘤。情形下日常，肿瘤细胞含量应20%适合NGS检测的机闭，含量10%坏死细胞。GS检测的基础需求机闭样本量应满意N，议厚度5～10 μm日常白腊切检规格修， mm×5 mm每片机闭面积5，的DNA或RNA以包管得到足够，差别检测项目而定但全体条款可根据。样本不提倡举办NGS检测酸脱钙管束过的白腊机闭，的白腊机闭样本如含骨机闭造备。织和细胞抗原因素的危害和丧失骨肿瘤的太过酸管束会形成组，色后果[45]影响IHC染，成差别水准的影响[46]同时对核酸总量及完全性造。本脱钙管束前提倡该类样，钙管束的疑似肿瘤机闭收罗周遭不必要举办脱；管束的肿瘤机闭对必要举办脱钙，酸（EDTA）管束（备用分子检测）两种法子同时举办可永诀采用常例脱钙（用于常例病理诊断）和乙二胺四乙。 IA）/中国及格评定国度承认委员会（CNAS）认证或承认的尝试室举办NGS检共鸣9：保举有美国病理学家协会（CAP）/美国临床尝试室鼎新法案校正案（CL测 目前仍基于古代的形状学观测骨与软机闭肿瘤的病理诊断，ohistochemistry辅省得疫机闭化学（immun，）符号IHC。年来近，e in situ hybridization寻常发展的荧光原位杂交（fluorescenc，骨与软机闭肿瘤的病理诊断供给了极大帮帮FISH）和基因突变检测（一代测序）为，因变异也已成为寻常运用的分子诊断目标部门通细致胞和分子遗传学探讨觉察的基，1基因易位以及高分裂和去分裂脂肪赘瘤中的MDM2、CDK4基因扩增等如采用FISH检测滑膜赘瘤中的SS18基因易位、尤文赘瘤中的EWSR；突变、梭形细胞/硬化性横纹肌赘瘤中的MYOD1基因突变以及骨大幼胞瘤中的H3F3A基因突变等[6采用一代测序检测胃肠道间质瘤中的KIT/PDGFRA基因突变、侵袭性纤维瘤病中的CTNNB1基因，9]8-。的延续发展和施行跟着分子检测时间，诊治和预后剖断中将会表现越来越紧张的效用[10]以NGS为代表的新型检测时间正在骨与软机闭肿瘤的。 些非常序列区域检出敏锐性消浸或存正在假阳性的也许NGS检测也存正在必然限造性：1）NGS检测正在某；贝数变异检出程度有限2）正在DNA层面拷，NA质地影响较大正在RNA层面受R，序容易污染等且扩增法测。表此，GS panel的检测限造临床职业中也应卓殊预防N。 ration sequencing二代基因测序（next-gene，DNA序列片断/读长举办测序领会NGS）能一次对几十万至几百万条，基因变异从而识别，向基因筛选以及表观遗传学领会等范畴目前已寻常运用于肿瘤的分子诊断、靶。年来近，NGS检测时间指南国表里已公告了多个，测序的肿瘤panels验证指南》等如《二代测序诊断指南》《基于二代，科室的时间参数圭臬为主但上述指南大凡以检讨，机闭肿瘤临床诊疗途径中的运用共鸣尚缺乏可指挥NGS检测正在骨与软。此因，瘤专业委员会牵头由中国抗癌协会肉，同切磋并撰写了本共鸣机闭行业内资深专家共，与软机闭肿瘤范畴内的运用旨正在范例NGS检测正在骨，于临床诊治更好地效劳，者受益使患。 前目，机闭肿瘤中的运用较为有限靶向或免疫诊疗正在骨与软。瘤和炎性肌纤维母细胞瘤等除骨大幼胞瘤、胃肠道间质，疫诊疗仍处于临床试验阶段其余无数肿瘤的靶向或免。的希望期赘瘤患者对待无圭臬诊疗，测寻找潜正在的药物靶点可试验通过NGS检，患者也许得到插足临床试验的机缘靶点阳性但无相应药物适宜证的。前目，剂（sirolimus）、PARP强迫剂（olaparib、niraparib、talazoparib）、EZH2强迫剂（tazemetostat）等正正在举办临床试验的药物席卷MDM2强迫剂（milademetan）、CDK4/6强迫剂（palbociclib、abemaciclib）、mTOR强迫。试验延续发展跟着新的临床，更多的诊疗机缘患者也许获得。 计划的骨与软机闭肿瘤患者举办NGS检测共鸣6：保举既往诊疗障碍且无有用代替，的临床试验机以寻找成亲会 瘤属于罕见肿瘤骨与软机闭肿，恶性肿瘤的0.2%恶性骨肿瘤仅占扫数，所占比例也亏折1%[1-3]软机闭赘瘤正在成人恶性实体瘤中。亚型繁多因为该病，性水准高、预后差且赘瘤性病变恶，大离间[4-6]给临床诊治带来巨。年来近，子遗传学兴盛至极迟缓骨与软机闭肿瘤的分，中起着极端紧张的效用不但正在临床病理诊断，学举止等方面也拥有紧张价钱[6-7]况且正在协帮临床造订诊疗战略和预测生物。法子的发展和运用跟着新的分子检测，新病种也正在延续表现基于特定基因非常的，瘤通过分子检测也获得了从新理解以往极少分裂不明或未分裂的肿，正在从形状学分类转向分子分类骨与软机闭肿瘤分类的根底正。 学诊断历程中正在分子病理，GS检测结果不划一的情形会映现常例分子学检测与N，NGS检测觉察有涉及该基因的协调基因如FISH检测某种基因重排阴性但经，的协调基因亚型或涉及其他少见；NGS未检出相对应的协调基因FISH检测某基因重排阳性但，ption-polymerase chain reaction此时可采用逆转录集中酶链反映（reverse transcri，3种检测时间举办验证RT-PCR）品级，威机构举办复检或送至其他权，测结果比对检，诊断的目标以抵达精准。 molecular tumor boards共鸣10：发起各单元组修分子肿瘤专家委员会（，B）MT，共鸣及解读流程根据国表里专家，GS检测结果确切解读N，准诊疗方造订精案 疗法子的希望期赘瘤患者对待无有用或者更好治，测寻找潜正在的药物靶点可试验通过NGS检，确知情承诺后正在得到患者明，证医学证据对靶点阳性的患者举办诊疗可能采用药品仿单中未明晰但拥有循。
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